PAI-1基因啟動(dòng)子區(qū)4G/5G基因多態(tài)性與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的關(guān)聯(lián)性研究
【摘要】目的探討纖溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)基因啟動(dòng)子區(qū)-6754G/5G基因多態(tài)性與不明原因反復(fù)自然流產(chǎn)的關(guān)系。方法對(duì)50例復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（研究組）及50例正常對(duì)照婦女（對(duì)照組），用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)技術(shù)，測(cè)定PAI-1基因啟動(dòng)子區(qū)-675處4G/5G基因及基因型。結(jié)果兩組間PAI-1基因型分布存在差異，研究組中4G/4G基因型和4G基因明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論P(yáng)AI-1基因啟動(dòng)子區(qū)4G/5G基因多態(tài)性與反復(fù)自然流產(chǎn)之間存在相關(guān)性，且4G/4G純合基因型是導(dǎo)致復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的易感基因型，臨床檢測(cè)PAI-1基因啟動(dòng)子區(qū)4G/5G基因多態(tài)性可幫助明確流產(chǎn)原因，早期治療，提高妊娠成功率。
【關(guān)鍵詞】復(fù)發(fā)性流產(chǎn)纖溶酶原激活物抑制物多態(tài)性
復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(RSA)是指與同一伴侶連續(xù)發(fā)生2次或2次以上的自然流產(chǎn)，其發(fā)病率為1%[1]。發(fā)病原因涉及多個(gè)學(xué)科，婦產(chǎn)科、遺傳科、免疫學(xué)、內(nèi)分泌學(xué)等，至今仍有30-40%的復(fù)發(fā)性流產(chǎn)原因不明[2]。纖溶酶原激活物抑制物-1是纖溶系統(tǒng)的主要生理抑制劑，其水平升高可導(dǎo)致纖溶活性降低，促使血栓形成，是血栓性疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一。有研究發(fā)現(xiàn)妊娠合并癥婦女中的PAI-1水平明顯高于正常妊娠婦女，且其基因型存在多態(tài)性，為探討纖溶酶原激活物抑制物-1基因啟動(dòng)子區(qū)4G/5G基因多態(tài)性與不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)之間的關(guān)系，我們做了如下研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。
1資料與方法
1.1研究對(duì)象選擇2010年7月-2011年7月來(lái)濰坊市人民醫(yī)院就診的重復(fù)流產(chǎn)且現(xiàn)已妊娠患者50例（研究組），年齡在23-40歲之間，平均為29.1歲，流產(chǎn)次數(shù)在2-9次之間，其中流產(chǎn)2次21例，流產(chǎn)≥3次29例，流產(chǎn)時(shí)間在孕38天-3個(gè)月不等，平均為69天。研究組患者經(jīng)篩查排除生殖器畸形、感染、宮頸機(jī)能不全、卵巢功能障礙、內(nèi)分泌異常、免疫相關(guān)因素異常、母兒血型不合等。
選取同期門(mén)診就診的正常妊娠婦女50例作為對(duì)照組，既往無(wú)流產(chǎn)史、胚胎停育史、胎兒生長(zhǎng)受限及死胎史等，B超檢查確定為早孕，查體為健康婦女且妊娠結(jié)局良好。兩組患者孕前及孕后均未給予藥物治療，排除心、腦血管疾病、無(wú)高血壓、糖尿病等病史，年齡、體重指數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
1.2方法標(biāo)本采集：抽取患者空腹肘靜脈血4ml，其中2ml注入抗凝EP管中，-20℃冰箱保存?zhèn)溆�；其�?ml注入1:9枸椽酸鈉抗凝管中，即刻(均在30min內(nèi))3000轉(zhuǎn)(rpm)離心10min，收集上清液即血漿加入到EP管中，-80℃冰箱保存?zhèn)溆�。采用聚合酶鏈反�?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)技術(shù)，即經(jīng)PCR擴(kuò)增→限制性核酸內(nèi)切酶消化→電泳→基因型讀取，檢測(cè)到3種基因型，4G/4G、4G/5G、5G/5G。
1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，數(shù)據(jù)采用x2檢驗(yàn)分析。
2結(jié)果
4G/4G、5G/5G、4G/5G三種基因型在研究組與對(duì)照組中的分布及4G、5G等位基因的分布采用行×列表資料的x2檢驗(yàn)，對(duì)各種基因型頻率和基因頻率在各組中的構(gòu)成比進(jìn)行分析，其結(jié)果P均<0.05，三種基因型和兩種等位基因在兩組中的構(gòu)成比之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明4G/4G、5G/5G、4G/5G三種基因型與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)之間存在一定的相關(guān)性；采用四格表的?2檢驗(yàn)分析4G、5G基因的分布，結(jié)果P<0.05，說(shuō)明4G基因在研究組的發(fā)病率明顯高于5G基因。3討論
自然流產(chǎn)是妊娠期常見(jiàn)的并發(fā)癥之一，其發(fā)病原因復(fù)雜，目前比較明確的原因有染色體的異常、抗磷脂抗體導(dǎo)致的流產(chǎn)、宮內(nèi)感染、子宮畸形等，大部分妊娠丟失的原因仍無(wú)法解釋，處于探索中。近年來(lái)易栓癥的概念備受關(guān)注，是指由于遺傳性缺陷和（或）獲得性缺陷而使妊娠期容易發(fā)生血栓栓塞的狀態(tài)，包括遺傳性和獲得性，這種血栓前狀態(tài)不一定發(fā)生血栓性疾病，但可選擇性影響子宮胎盤(pán)循環(huán)而導(dǎo)致胎盤(pán)的微血栓形成，胎盤(pán)循環(huán)障礙，妊娠本身是一種獲得性的高凝狀態(tài)，主要表現(xiàn)為生理性抗凝物質(zhì)減少，促凝活性增加，纖溶活性降低，從而引發(fā)妊娠合并癥的發(fā)生。
PAI-1是Brakman和Astrup于1963年首先在孕婦血中發(fā)現(xiàn)，是由379個(gè)氨基酸殘基組成，分子量約為50ku的單鏈糖蛋白。妊娠后,胎盤(pán)與子宮肌層也可生成PAI-1。PAI-1是游離型單鏈t-PA快速的唯一抑制物,也是游離型雙鏈t-PA的抑制劑。其作用機(jī)制是二者先形成可逆性的不穩(wěn)定復(fù)合物，后演變成穩(wěn)固的復(fù)合物，從而抑制纖溶酶的活性。
PAI-1基因啟動(dòng)子區(qū)4G/5G多態(tài)性指的是，在轉(zhuǎn)錄起始上游-675bp(5′端啟動(dòng)子區(qū))處存在一個(gè)G的插入或缺乏，142bp是PAI-1基因的PCR產(chǎn)物，經(jīng)Bsll酶切消化后將會(huì)出現(xiàn)不同的特異片段，產(chǎn)生3種基因型，即4G/4G型、5G/5G型、4G/5G型。Ericksson等研究證明，轉(zhuǎn)錄起始因子位點(diǎn)在4G、5G等位基因均存在，5G基因與抑制蛋白結(jié)合后，覆蓋了阻遏蛋白與其相結(jié)合的位點(diǎn)，空間結(jié)構(gòu)的改變后干擾了PAI-1轉(zhuǎn)錄水平，4G等位基因沒(méi)有轉(zhuǎn)錄抑制抑制位點(diǎn)，4G基因轉(zhuǎn)錄水平較5G基因高6倍。本研究表明PAI-1基因啟動(dòng)子區(qū)基因多態(tài)性與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)之間存在相關(guān)性，4G基因發(fā)病率高于5G基因，表明4G基因與5G基因相比，其與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的關(guān)系更為密切。在臨床工作中，檢測(cè)PAI-1基因分型有助于明確流產(chǎn)原因，早期治療，提高妊娠成功率。
參考文獻(xiàn)
[1]曹澤毅，主編．中華婦產(chǎn)科學(xué)．第2版．北京：人民衛(wèi)生出版社，2005，98．
[2]EvelyneRey，SuanRKahn，etal.TheLancet，2003;361:901-908
【PAI-1基因啟動(dòng)子區(qū)4G/5G基因多態(tài)性與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的關(guān)聯(lián)性研究】相關(guān)文章：
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