水環(huán)境糞大腸菌群監(jiān)測2種分析方法的對比論文
糞大腸菌群是監(jiān)測水體是否被糞便污染的指示菌，是監(jiān)測地表水尤其是飲用地表水的重要指標(biāo)之一。它是總大腸菌群的一部分，其基本性狀和總大腸菌群相似。在實驗時，將培養(yǎng)溫度提高到44.5°C，我們把可以在此條件下生長并發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣的，稱糞大腸菌群。
經(jīng)典的糞大腸菌群的監(jiān)測方法是采用多管發(fā)酵法，但這種方法具有前期準(zhǔn)備時間長、任務(wù)繁重;培養(yǎng)過程中操作繁瑣的缺點，并且事后還要清洗大量的試管，浪費人力、物力、財力。為此很多廠家研發(fā)了大腸菌群的快檢紙片。采用紙片法，大大縮短了實驗的時間，并且根本不需要再清理大量的試管，減輕了勞動強度，也節(jié)約了寶貴的水資源。那么，多管發(fā)酵法和紙片法的數(shù)據(jù)究竟有沒有相關(guān)性?作者采用某廠生產(chǎn)的大腸菌群的快檢紙片通過對比實驗旨在探討這個問題。
一、分析方法
1、多管發(fā)酵法
(1)培養(yǎng)基
單倍和三倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(培養(yǎng)液的成分與制備略，下同)
EC培養(yǎng)液
(2)步驟
�、偎畼咏臃N量：將水樣充分混勻后，根據(jù)水樣污染的程度確定水樣的接種量，每個樣品至少用3個不同的水樣量接種，同一接種水樣量要有五管。
如果接種的體積為10ml，則接種于含有三倍濃度5ml的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管內(nèi)，如果接種量為1ml或者小于1ml，則接種于含有單倍濃度10ml的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管內(nèi)。
�、诔醢l(fā)酵：
將接種了水樣的試管，在37±0.5°C下培養(yǎng)24±2h，產(chǎn)酸和產(chǎn)氣的發(fā)酵管表明實驗陽性。如產(chǎn)氣不明顯，可輕拍試管，有小氣泡升起的為陽性。
�、蹚�(fù)發(fā)酵試驗
輕微振蕩初發(fā)酵陽性的發(fā)酵管，用3mm接種環(huán)將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到EC培養(yǎng)液中。在44±0.5°C水浴中培養(yǎng)24±2h，培養(yǎng)后立即觀察。發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣表明確信試驗陽性。
�、苡嬎愫蛨蟾娼Y(jié)果
根據(jù)不同接種量的發(fā)酵管所出現(xiàn)的陽性結(jié)果的數(shù)目，從MPN表中查相應(yīng)的MPN指數(shù)，計算出每升水中糞大腸菌群的MPN值。
2、紙片法
采用某廠生產(chǎn)的大腸菌群快檢紙片
�、偎畼咏臃N量：將水樣充分混勻后，根據(jù)水樣污染的程度確定水樣的稀釋倍數(shù)，每個樣品至少用3個不同的水樣量接種，同一接種水樣量要有五個紙片。
如果接種的體積為10ml，則接種于大紙片內(nèi)。如果接種量為1ml或者小于1ml，則接種小紙片內(nèi)。
�、诎l(fā)酵試驗
樣品接種后在44±0.5°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10-16小時后，觀察結(jié)果。
�、塾嬎愫蛨蟾娼Y(jié)果
紙片說出現(xiàn)紅點，其周圍呈黃色者為陽性。根據(jù)不同接種量的紙片所出現(xiàn)的陽性結(jié)果的數(shù)目，從MPN表中查相應(yīng)的MPN指數(shù)，計算出每升水中糞大腸菌群的MPN值。
二、t檢驗的結(jié)果
根據(jù)成對樣本的假設(shè)檢驗，對這2組數(shù)據(jù)進行成對數(shù)據(jù)平均數(shù)的比較，看它們有無顯著性差異。
(公式略)
計算結(jié)果：t=0.648,查“t值表”，df=14-1=13,t0.01,13=3.012,現(xiàn)實得t0.01。
推斷：認(rèn)為2種試驗方法沒有顯著性差異。
三、結(jié)論
紙片法和多管發(fā)酵法監(jiān)測的結(jié)果沒有顯著性差異，用紙片法取代多管發(fā)酵法完全可行。
(一)與傳統(tǒng)的多管發(fā)酵法相比，紙片法具有如下優(yōu)點：
1、時間短——10-16小時出檢測結(jié)果，大大縮短了監(jiān)測時間;
2、降低了監(jiān)測人員的工作強度——省去了煩瑣的前期培養(yǎng)基的配制、分裝、滅菌，后期洗刷試管，中期重新接種、培養(yǎng)等工作;
3、結(jié)果易于判斷——根據(jù)顏色識別，不用費力觀察氣泡，檢測結(jié)果判定簡單直觀;
(二)在使用紙片法時，筆者認(rèn)為需要注意以下幾點：
1、對取樣量為1ml的紙片，移液管要在紙片的中央放液，使樣品均勻的向四周擴散。
2、取樣量為10ml的紙片，因為水樣不能完全被紙片吸收，要盡量避免接種后和培養(yǎng)時水樣流出，造成誤差。
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